上周，廈門(mén)大學(xué)黃老師通過(guò)對多家ELISA試劑盒供應商的考察和了解，選擇了上海通蔚，并在我司購買(mǎi)了植物ELISA試劑盒。售后我司致電黃老師詢(xún)問(wèn)有沒(méi)有什么產(chǎn)品疑問(wèn)或實(shí)驗問(wèn)題，黃老師說(shuō)想要了解一下Elisa注意事項。為此，我司技術(shù)人員對Elisa的注意事項做出了如下解答：

ELISA注意事項：

1.正式試驗時(shí)，應分別以陽(yáng)性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實(shí)驗結果的準確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2.在ELISA中，進(jìn)行各項實(shí)驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

(1)固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗條件下進(jìn)行反應，觀(guān)察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

(2)包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時(shí)，觀(guān)察陽(yáng)性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。

(3)酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗系統里準確地滴定其工作濃度。

(4)酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入.

黃老師對我司的解答非常滿(mǎn)意，為我司的技術(shù)服務(wù)點(diǎn)贊。也要感謝黃老師對我司的支持與信任。

上海通蔚生物科技有限公司經(jīng)過(guò)數年的努力，已迅速成為集科研和生產(chǎn)為一體的專(zhuān)業(yè)化生物工程公司，特別是ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)，已使上海通蔚成為中國。