怎樣凍存
動(dòng)物細胞株？一個(gè)實(shí)驗室得到一個(gè)新的細胞株后，首先要把該細胞株培養擴增后凍存起來(lái)。細胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細胞時(shí)有備份可用，另外幾乎所有細胞在培養傳代的過(guò)程中發(fā)生一定程度的變異，為了保持實(shí)驗結果的一致，一般細胞在培養幾十代以后就不能再使用了，需要將凍存的，傳代較少的細胞化凍培養再使用。
細胞冷凍過(guò)程有四個(gè)要點(diǎn)：細胞的收獲、保護劑的使用、冷凍速率和儲存環(huán)境。
一、細胞的收獲
用來(lái)凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿(mǎn)90%的時(shí)候，這時(shí)細胞生長(cháng)狀態(tài)好，細胞數量也多，并且在收獲細胞前24小時(shí)換一次培養液。收獲用來(lái)凍存的細胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣，用100xg離心5分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數。
稀釋或濃縮到細胞保存的細胞濃度的二倍（一般是400-1000萬(wàn)細胞/ml），加入已經(jīng)配好的等體積的培養液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
二、保護劑的使用
細胞凍存中，一般使用DMSO作為保護劑。在動(dòng)物細胞株凍存中，DMSO使用的濃度一般是5-15%，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。
對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時(shí)使用95%血清和5%DMSO可能會(huì )好些。保護劑在使用時(shí)先用培養液或血清配成濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養液混合。
三、細胞凍存的速率
動(dòng)物細胞株的冷凍速率適控制在讓細胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導致細胞損害。對大多數細胞來(lái)說(shuō)，每分鐘降1至3℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí)，再放入-80℃冰箱過(guò)夜（如果沒(méi)有-80℃冰箱，可以用干冰替代），再轉入液氮罐或低于-130℃的冰箱長(cháng)期保存。
四、儲存環(huán)境
細胞長(cháng)期保存溫度是-130℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在-140℃至-180℃之間，動(dòng)物細胞株可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細胞時(shí)引起爆炸（但是這樣液氮罐內只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加）。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
