造成
動(dòng)物elisa試劑盒檢測數據不一樣的原因,除了一些實(shí)驗操作、實(shí)驗環(huán)境等客觀(guān)因素外,還有試劑盒質(zhì)量參數,如重復率、板內差、板間差、線(xiàn)性稀釋、回收率等。
但是,重要的影響因素可能是作為檢測標尺的標準品。接下來(lái),通蔚生物就揭曉影響不同elisa試劑盒檢測數據的差異和關(guān)于標準品的幾個(gè)疑惑。
一、不同的動(dòng)物elisa試劑盒如何進(jìn)行校準?
1、國際標準物進(jìn)行校準:目前,elisa試劑盒比較好的校準方法為應用NIBSC/WHO推薦的標準品對試劑盒進(jìn)行校準。
2、高質(zhì)量的原料進(jìn)行校準:elisa試劑盒的檢測指標種類(lèi)可能遠遠多于NIBSC/WHO推薦的標準品,有時(shí)需要依靠高質(zhì)量的elisa試劑盒原料。
目前,進(jìn)口原料依然是生產(chǎn)高質(zhì)量elisa試劑盒的前提條件之一,但是不同品牌的蛋白表達體系和質(zhì)控標準不同,可能會(huì )導致原料的性能不同,進(jìn)而造成檢測數據的差異。
3、嚴謹的生物樣本進(jìn)行驗證:隨著(zhù)國內生物技術(shù)的發(fā)展,自主研發(fā)蛋白表達、抗體制備、elisa試劑盒開(kāi)發(fā)技術(shù)也在不斷進(jìn)步。
除了應用NIBSC/WHO推薦的標準品對試劑盒進(jìn)行校準外,也可用一些暫無(wú)權威機構認可的生物樣本進(jìn)行驗證,按照科學(xué)研究方法,對種屬、性別、生命周期階段、種類(lèi)等因素劃分所得到的生物樣本進(jìn)行驗證。
二、elisa試劑盒的標準品如何使用?
如果動(dòng)物elisa試劑盒的標準品是重組蛋白,請提前20-30分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(18-25℃),如果試劑盒需分多次使用,請僅取出本次實(shí)驗所需的酶標板條和試劑,剩余板條和試劑需按照指定條件保存。
標準品工作液的配制:將標準品的凍干粉末盡量集中到西林瓶或離心管底部,加入標準品/樣品稀釋液至凍干標準品中,室溫水平靜置10分鐘,讓重組蛋白恢復其空間構象,然后上下顛倒數次,待其充分溶解后,輕輕混勻,避免起泡,然后進(jìn)行分裝和使用即可。
標準品的保存和棄用:如果1個(gè)月內使用,動(dòng)物elisa試劑盒標準品可以暫存于4℃;如果1個(gè)月以上不用,標準品必須保存于-20℃以下環(huán)境;已配制好的標準品工作液如有剩余液體請切記要棄用,標準品工作液一定要現配現用。