食品酶免試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物果糖(fructose)水平。用純化的植物果糖(fructose)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物果糖(fructose)，再與HRP標記的果糖(fructose)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的植物果糖(fructose)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中植物果糖(fructose)濃度。
食品酶免試劑盒的標本要求：
1.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
食品酶免試劑盒的操作步驟：
1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
240ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
120ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
60ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
30ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
15ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(此時(shí)藍色立轉)。
11.測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。
