細胞培養中的無(wú)菌技術(shù)
1. 實(shí)驗進(jìn)行前,無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺面,并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺風(fēng)扇運轉10 分鐘后,才開(kāi)始實(shí)驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實(shí)驗完畢后,將實(shí)驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺面。操作間隔應讓無(wú)菌操作臺運轉10分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細胞株的操作。
2. 無(wú)菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺內。實(shí)驗操作應在臺面的中央無(wú)菌區域,勿在邊緣的非無(wú)菌區域操作。
3. 小心取用無(wú)菌的實(shí)驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開(kāi)的容器正上方操作實(shí)驗。容器打開(kāi)后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應注意自身的安全,須穿戴實(shí)驗衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗。對于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染的細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級的無(wú)菌操作臺(至少Class II)。操作過(guò)程中,應避免引起aerosol 的產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭的傷害等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力
5.2. CO2 培養箱的CO2 濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水用無(wú)菌水,每周更換)。
5.3. 無(wú)菌操作臺內的airflow 壓力,定期更換紫外線(xiàn)燈管及HEPA 過(guò)濾膜,預濾網(wǎng)(300小時(shí)/預濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水。
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