外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時(shí)間過(guò)長(cháng)和標本凝固不全等。

1．標本溶血
要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。

2．標本被細菌污染
樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長(cháng)，其所分泌的一些酶可能會(huì )對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的p—半乳糖苷酶本身會(huì )對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

3．標本貯存時(shí)間過(guò)長(cháng)
標本在2～8~C下保存時(shí)間過(guò)長(cháng)，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性。血清標本如是以無(wú)菌操作分離，則可以在2～8~C下保存1周，如為有菌操作，則建議冷凍保存。樣本的長(cháng)時(shí)間保存，應在一70~C以下。

4．標本凝固不全
血液采集后，如收集管中無(wú)促凝劑和抗凝劑，則血液通常在半小時(shí)后開(kāi)始凝固，18～24h*凝固。日常檢驗中，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即離心分離血清，此時(shí)因血液沒(méi)有*凝固，離出的“血清”并非為*的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，如將其加入微孔中，在ELISA測定過(guò)程中仍可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結果。因此，血液標本采集后，應使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。

5．冷凍保存標本避免反復凍融
冷凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。此外，標本在保存中如出現細菌污染所致的渾濁或絮狀物時(shí)，應離心沉淀后取上清檢測。