免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)或稱(chēng)免疫細胞化學(xué)(1CC)是根據特異性抗原抗體反應的原理來(lái)定位組織或細胞內的抗原或抗體成分。自1940年Coons創(chuàng )建了免疫熒光組化技術(shù)檢測冰凍切片中的相關(guān)抗原成分以來(lái),已有60涂年的歷史。
免疫組織化學(xué)技術(shù)根據示蹤物的不同可構成不同的免疫組織化學(xué)方法,如標記熒光素或熒光蛋白可構成免疫熒光組化技術(shù);如標記酶(HRP或AKP)可構成免疫酶組化技術(shù);如標記金或鐵可構成免疫膠體金(銀)或膠體鐵技術(shù)。
1967年Nakane創(chuàng )建的免疫酶組織化學(xué)技術(shù)是目前開(kāi)展免疫組織化學(xué)技術(shù)zui常用的方法。該技術(shù)是借助于抗體與抗原的特異性結合并利用酶作用底物所產(chǎn)生的顏色反應來(lái)顯示抗原存在的一種技術(shù)。其基本原理與免疫熒光技術(shù)相同,是在免疫熒光技術(shù)基礎上發(fā)展起來(lái)的,所不同的是免疫酶組織化學(xué)技術(shù)是用酶標記抗體。其方法是以酶作示蹤物,與抗原或抗體結合,然后根據酶與底物間產(chǎn)生的可溶性或不溶性顏色產(chǎn)物,借助于光鏡或電鏡觀(guān)察細胞及亞細胞水平的抗原或抗體的存在和分布。
Nakane等將辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記在抗體免疫球蛋白分子上,制成酶標抗體,成功地創(chuàng )建了酶標抗體技術(shù)。
1970年,Sternberger利用酶免疫學(xué)原理,建立了非標記抗體免疫過(guò)氧化物酶法,即PAP復合物法。自那以后,免疫酶組織化學(xué)技術(shù)有了很大的發(fā)展,得到廣泛應用,相繼出現了親和免疫組化技術(shù)、免疫堿性磷酸酶技術(shù)、多聚螯合物酶技術(shù)、自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色技術(shù)等新技術(shù)。它與免疫熒光技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
①不需要特殊顯微鏡,目前已成為zui常用的IHC方法,應用廣泛;
②定位準確,對比度好;
③染色標本可長(cháng)期保存;
④可用蘇木精等染料復染,便于與形態(tài)學(xué)相結合;
⑤顯色反應的產(chǎn)物顏色易分辨,且電子密度大,便于光鏡及電鏡觀(guān)察;
⑥可根據酶和底物/供氫體的不同顯示不同的顏色,可非常容易地進(jìn)行雙重或多重染色。
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