細胞培養方法由上海通蔚實(shí)業(yè)專(zhuān)業(yè)提供:
進(jìn)入操作時(shí)應注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時(shí)注意無(wú)菌臺內空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來(lái)往,如果數量較多,培養瓶應放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應相隔一定的距離,開(kāi)瓶(蓋)時(shí)應先用75%酒精反復擦拭或用燈燒,開(kāi)開(kāi)后應用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.整個(gè)操作過(guò)程盡量在無(wú)菌臺靠里面一點(diǎn)。
1.玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時(shí)以上。
2.無(wú)菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線(xiàn)照射40分鐘以上;各種培養板照射3小時(shí)以上。
3.培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無(wú)菌試驗:將血清按10%加入培養基內,用無(wú)菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養基5-10ml置培養箱內培養2-3天,肉眼見(jiàn)無(wú)渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存。
4.消化液(pH7.8)或其它加入液,應用高壓蒸汽滅菌或一次性無(wú)菌濾器過(guò)濾除菌,分裝成支置-20度保存
5.培養箱應先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線(xiàn)的應照射1小時(shí)以上,如有高溫滅菌的應按程序來(lái)菌).至少每月一次。

 

細胞復蘇:
1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-37.5度,取出凍存的細胞迅速放入后交細胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。
2.在無(wú)菌臺內將*培養基加入50ml的小培養瓶?jì)?約5ml左右,然后用無(wú)菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養并內輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養箱內培養。
細胞傳代:
1.貼壁細胞:
對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱.50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據配制強度經(jīng)驗),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鐘,鏡下見(jiàn)細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養瓶?jì)?加入*培養基后繼續培養或實(shí)驗。
2.懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶?jì)?加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心500rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶?jì)燃尤?培養基繼續培養。