我司專(zhuān)業(yè)的ELISA試劑盒技術(shù)骨干有三個(gè)小經(jīng)驗和大家分享一下：
 

A 不要燒瓶口
大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jì)?。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養基中的碳酸就會(huì )轉化成二氧化碳，釋放出來(lái)。培養基中的碳酸少了，當然會(huì )變堿。如果不燒瓶口的話(huà)，你會(huì )發(fā)現培養液變堿的速度會(huì )大大減慢。（當然多多少少還是會(huì )有一點(diǎn)越用越堿，因為室溫還是比冰箱內的溫度高）

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì )發(fā)現根本就不會(huì )燒疼。如果有細菌的話(huà)，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國以后發(fā)現這里更*，超凈臺內根本就不點(diǎn)酒精燈。

B 不要頻繁看細胞
對于初學(xué)者而言，養細胞就像養孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養不好，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細胞對細胞的生長(cháng)沒(méi)有任何好處，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養基中的生長(cháng)因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(cháng)的因子在其周?chē)?，形成有利于生長(cháng)的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?，細胞老是長(cháng)不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長(cháng)。

C 不要怕消化
在傳代的時(shí)候，ELISA試劑盒初學(xué)者往往生怕細胞消化過(guò)度，早早地終止消化。細胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿(mǎn)瓶子都是氣泡。在我看來(lái)，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我師兄在做血管平滑肌原代的時(shí)候，37度消化過(guò)夜，細胞也沒(méi)事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機械應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。