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                              PCR-ELISA端粒酶檢測法
                              更新時(shí)間:2010-11-16   點(diǎn)擊次數:3538次

                              端粒是真核生物染色體末端的特異DNA-蛋白結構,端粒DNA是一系列重復的富含G的DNA序列,這一序列在生物進(jìn)化中有高度的保守性(人重復序列為T(mén)TAGGG)。已確認端粒在保護基因組DNA不被降解、防止染色體有害的結合(如染色體末端融合、重排、染色體移位和染色體缺失)中起重要作用。

                              由于DNA聚合酶不能復制線(xiàn)性DNA的zui末端,多數正常體細胞的端粒末端每經(jīng)一個(gè)復制循環(huán)就進(jìn)行性縮短。這一現象在體內和體外都得到證實(shí),并且可能與真核生物的正常體細胞有限的繁殖能力有關(guān)。

                              這一活性可能在與細胞衰老有關(guān)的情況中起作用。與體細胞相對照,生殖細胞是永生性的,它需要為將來(lái)器官形成保存全部的遺傳信息。因此它必須對抗端??s短。這一工作通過(guò)在基因組染色體的末端添加新的端粒重復序列而完成。

                              端粒酶是一種核糖核蛋白,它們用自身的RNA成份的互補序列作模板,催化TTAGGG重復序列加到染色體末端。在大多數永生性細胞株和腫瘤細胞株中也可見(jiàn)端粒酶活性的表達。端粒酶反應超越了細胞的增殖限制,這可能是惡性腫瘤發(fā)生的一個(gè)先決條件。

                              傳統的端粒酶研究方法是以探針延伸為基礎測定端粒酶活性。由于需要大量的樣品材料,且檢驗靈敏度受局限,這一方法已被端粒重復擴增法(omeric Repeat Amplification Protocol,TRAP)所取代。

                              標準的TRAP測定是通過(guò)PCR擴增端粒酶反應的產(chǎn)物,使用放射性標記,經(jīng)凝膠電泳后,通過(guò)放射自顯影顯示結果。

                              這里介紹使用非放射性標記的檢測端粒酶的新方法:活性光密度酶聯(lián)免疫測定法。這種方法具有如下特點(diǎn):

                              安全,無(wú)需使用放射性同位素

                              一步反應,使用即用的混合物使端粒酶介導的引物延伸和PCR擴增可在一個(gè)試管中進(jìn)行。

                              應用廣泛,擴增后可適用于不同分析法。

                              靈敏,與放射性同位素TRAP測定相當。

                              可靠,準確、重復性好。

                              快速,6-8小時(shí)得到結果。

                              上海通蔚生物科技有限公司

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                              地址:上海市金山區楓涇鎮環(huán)東一路65弄2號3463室

                              主營(yíng)產(chǎn)品:ELISA檢測試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,豚鼠ELISA試劑盒,兔ELISA試劑盒,羊ELISA試劑盒,牛ELISA試劑盒,雞ELISA試劑盒,鴨ELISA試劑盒

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