ELISA直接法試驗過(guò)程：
一、包被抗原
1) 用 PBS 或碳酸鹽緩沖液稀釋抗原至終濃度 20 μg/ml。用移液器汲取 50 μl 稀釋抗原到 PVC 酶標板上，按要求往后進(jìn)行系列稀釋。
2) 酶標板上掩蓋封口膜，室溫孵育 2 小時(shí)，或許 4 °C 過(guò)夜。孵育時(shí)刻需求優(yōu)化。
3) 倒掉孵育溶液，用 PBS 洗板 2 次，每孔 200 μl。在水池上輕甩倒掉洗液，在紙巾上輕拍酶標板除去殘留液體。
二、關(guān)閉
1) 用含 5% 脫脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 緩沖液關(guān)閉酶標板上剩下的蛋白位點(diǎn)，每孔 200 μl?；蛟S用別的關(guān)閉劑如 Block ACE、BSA（牛血清蛋白）替代。
2) 封口膜掩蓋酶標板室溫zui少孵育 2 小時(shí)，或許 4 °C 過(guò)夜。
3) PBS 洗板 2 次。
三、加抗體孵育
1) 參加抗體，每孔 100 μl，稀釋到濃度（參照廠(chǎng)家引薦），使用前用關(guān)閉液現配。
2) 封口膜掩蓋酶標板室溫孵育 2 小時(shí)，孵育時(shí)刻需求進(jìn)行優(yōu)化。一般 2 小時(shí)孵育即可取得滿(mǎn)足強的信號，但如果取得的信號較弱時(shí)，可4 °C 孵育過(guò)夜取得較強信號。
3) PBS 洗板 4 次
四、檢查
1) 用多通道吸液器參加底物，每孔 100 μl（或 50 μl）。
2) 顯示出滿(mǎn)足深的色彩后，加停止液（如有必要），每孔 100 μl。