因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點(diǎn)。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時(shí)間的溫育。ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì )，這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程，ELISA試劑盒只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
  溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗。在建立ELISA試劑盒方法作反應動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達。為加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過(guò)夜，以形成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(cháng)，在ELISA試劑盒中一般不予采用。