在使用前與室溫平衡，再進(jìn)行測定。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育（incubation），有人稱(chēng)之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。
ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì )，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。

    如果對試劑準備不太注意，在實(shí)驗時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問(wèn)題影響后面的操作。測定中試劑的準備zui為關(guān)鍵的是，在實(shí)驗開(kāi)始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20min以上后，以使試劑盒       

2. 當混合蛋白溶液時(shí)應盡量輕緩，避免起泡。

3. 洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。

4. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

5. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，做復孔。

6. 如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高，請先稀釋后再測定。

7. 在配制標準品、檢測溶液工作液時(shí)，請以相應的稀釋液配制，ELISA試劑盒不能混淆。

8. 底物請避光保存。

9、控制好每一步的操作時(shí)間。