關(guān)于ELISA試劑盒的每一步都要注意才行。 ELISA試劑盒加樣時(shí)的防錯小經(jīng)驗 （1）用一張寫(xiě)滿(mǎn)字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過(guò)標本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì )變小，沒(méi)加的字正常，非常容易區分。 （2）可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區別 （3）在標本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產(chǎn)生小氣泡，也可以加以區分 3、棋盤(pán)試驗的操作方法： （1）將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下（或者從左到右）的順序包被。 （2）將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA試劑盒從左到右或者從上到下加入。 （3）二抗的稀釋倍數是一定的，然后顯色，讀值。 OD值的測定時(shí)，波長(cháng)要根據顯色劑的不同而定，一般上大家都使用TMB顯色，450nm讀值。根據讀值得結果可以選定合適的抗原和抗體效價(jià)，這就是棋盤(pán) 實(shí)驗的目的，如果抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話(huà)就用一抗和二抗作棋盤(pán)試驗。

注意事項

1．ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，ELISA試劑盒以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。