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                              如何選擇ELISA試劑盒
                              更新時(shí)間:2015-09-18   點(diǎn)擊次數:809次

                              為什么選擇ELISA試劑盒?
                              以TNF-a為例,Meso Scale Discovery? Vplex電化學(xué)發(fā)光試劑盒以0.04pg/mL的靈敏度是普通ELISA(7 pg/mL左右)的100多倍。如果實(shí)驗樣本中的TNF-a低于7pg/mL,這就意味著(zhù)實(shí)驗數據會(huì )無(wú)法檢測,實(shí)驗沒(méi)有定量結論。另外一個(gè)案例,臨床常規測定普通CRP的方法檢測線(xiàn)性一般為3~200mg/L,而預測心血管事需要更高靈敏度的CRP,超敏或高敏CRP (hs-CRP)。

                              ELISA試劑盒檢測什么樣本?試驗周期多長(cháng)?
                              1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如出現沉淀,應再次離心。
                              2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應該再次離心。
                              3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
                              4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
                              5. 組織標本:切割標本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
                              6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
                              7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

                              如實(shí)驗研究周期較長(cháng),ELISA試劑盒盡量選擇一個(gè)批次的,以防止不同批次間的差異。然而由于普通ELISA有效期在3-12個(gè)月,而實(shí)驗周期往往在1-2年以上,一些長(cháng)期臨床實(shí)驗項目甚至在5-10年,因而經(jīng)常面臨不同批次的挑戰。而Meso Scale Discovery?Vplex試劑盒經(jīng)過(guò)54個(gè)月穩定性測試。

                              上海通蔚生物科技有限公司

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