ELISA檢測試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據試劑的來(lái)源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類(lèi)型的檢測方法。
(一)雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：
(1)將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質(zhì)。
(2)加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時(shí)間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質(zhì)。
(3)加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
(4)加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據顏色反應的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
(二)雙位點(diǎn)一步法
在雙抗體夾心法測定抗原時(shí)，如應用針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時(shí)可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步(圖15-5)。這種雙位點(diǎn)一步不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反應時(shí)間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著(zhù)提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA檢測試劑盒提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應(hookeffect)，類(lèi)同于沉淀反應中抗原過(guò)剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應嚴重時(shí)甚至可出現假陰性結果。
(三)間接法測抗體
間接法是檢測抗體zui常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱(chēng)為間接法。
(1)將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質(zhì)。
(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結合，在洗滌過(guò)程中被洗去。
(3)加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。ELISA檢測試劑盒例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
(4)加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。