在臨床實(shí)驗室，對試劑準備一般不太注意，通常的做法是，在實(shí)驗時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問(wèn)題，其直接的后果是對一些弱陽(yáng)性標本的檢測出現假陰性。因此在ELISA檢測試劑盒測定中試劑的準備zui為關(guān)鍵的是，在實(shí)驗開(kāi)始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。

    這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度，以滿(mǎn)足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應保證質(zhì)量。此外，當試劑盒以OPD為底物時(shí)，則底物溶液應在反應顯色前臨時(shí)配制。溫育是ELISA檢測試劑盒測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上，必須在一定的溫度條件下反應一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對較短。

    zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會(huì )對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，ELISA檢測試劑盒很容易出現重復滴加或加在兩孔之間的現象，這樣就會(huì )在孔內的非包被區出現非特異吸附，從而引起非特異顯色。所以，有時(shí)候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽(yáng)性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。