環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面分析ELISA檢測試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法一、選擇試劑選擇質(zhì)量?jì)?yōu)良的檢測試劑，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

二、加樣

可能原因：

1)血清或血漿標本分離不好即進(jìn)行加樣; 2)手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(cháng)(特別是室內溫度較高時(shí)); 3)加完標本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

解決辦法：

1) 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時(shí)，請分批操作。

三、 孵育

可能原因：

1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*; 2) 孵育時(shí)間人為延長(cháng)，導致非特異性結合緊附于反應孔周?chē)?，難以清洗*。

解決辦法：

1) 貼封片或加蓋; 2) 按說(shuō)明步驟嚴格控制操作時(shí)間。

四、洗板

可能原因：

1) 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動(dòng)洗板機洗板時(shí)，洗液量不足，導致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(cháng)。

解決辦法：

1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，ELISA檢測試劑盒洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。

五、顯色

可能原因：

1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(cháng)或使用過(guò)期顯色劑; 2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。

解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流; 3) A、B液應避免接觸金屬器械。

六、終止

可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應避免產(chǎn)生氣泡。

七、讀板

如讀板時(shí)板底不清潔等。應保證酶標板清潔。ELISA檢測試劑盒所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現ELISA檢測標準自動(dòng)化，有效提高檢測質(zhì)量。