ELISA檢測系統可謂是免疫學(xué)反應應用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段。自己也為此苦惱過(guò)很長(cháng)一段時(shí)間，跟著(zhù)自己技術(shù)水平得進(jìn)步，ELISA試劑盒或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現在做方陣，做ELISA已是輕車(chē)熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下戰書(shū)還算得暈暈的，現在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定?？墒窃谛吕鲜植倏v過(guò)程中老是會(huì )泛起或大或小的題目，本人在剛開(kāi)始做ELISA時(shí)就面對良多災題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說(shuō)花板，假陽(yáng)性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。

    包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保留抗原很重要，ELISA試劑盒我做重組蛋白時(shí)，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)因為試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。

    常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實(shí)踐，看一下*可不可以應用到自己試驗當中去。但*選用什么，要依據試驗詳細來(lái)實(shí)踐。應留意以下原理：ELISA試劑盒因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附長(cháng)短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴(lài)和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。