在做ELISA試劑盒實(shí)驗過(guò)程中，難免會(huì )遇到各種不同的問(wèn)題，比如標準曲線(xiàn)不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽(yáng)性，實(shí)驗的重復性不好等等?，F在就來(lái)一一解答用戶(hù)們在實(shí)驗過(guò)程中遇到的各種疑問(wèn)！
ELISA試劑盒曲線(xiàn)問(wèn)題： 

1.OD值不正常

試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好，控制正確溫度

孵育時(shí)間不準確，控制孵育時(shí)間

洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(cháng)、洗滌次數增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干

陽(yáng)光直射，對著(zhù)風(fēng)直接吹，避風(fēng)避

酶標儀的波長(cháng)錯誤，酶標儀的波長(cháng)450nm

抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體

水質(zhì)問(wèn)題，用娃哈哈礦泉水代替

2.白   板

洗滌液配制錯誤，正確的配制洗滌液

少加液體（錯加液體），正確的步驟加液體

3.無(wú) 梯 度

標準品也污染，換標準品點(diǎn)板

OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次

人為點(diǎn)板，不要點(diǎn)板

4.線(xiàn) 性 不 好

OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次

ELISA試劑盒回收率

ELISA試劑盒1.空白管陽(yáng)性高

樣本本身就是陽(yáng)性樣本，換陰性樣本做回收率

空白管在實(shí)驗中被污染，實(shí)驗中防止交叉污染

水質(zhì)原因用，娃哈哈礦泉水代替

2.偏  高

添加量不準確，的添加量

添加濃度不適合，添加合適的濃度

取液吹干量多，準確的取液吹干

取到其它相層液體，取需用相吹干

復溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復溶液

ELISA試劑盒3.偏  低

添加量不準確，的添加量

添加濃度不適合，添加合適的濃度

取液吹干量少，準確的取液吹干

復溶液稀釋錯誤或加入量多，正確的稀釋復溶液

假陰、陽(yáng)性

1，水質(zhì)原因：點(diǎn)復溶液驗證，用娃哈哈礦泉水代替

2，實(shí)驗操作原因

吸取到其它相吹干，準確的取液吹干

離心不*，延長(cháng)離心時(shí)間

樣本的污染，更換樣本

乳化未處理*，溫?。?0℃）處理乳化現象

3，儀器試劑原因

離心管未清洗干凈，正確的洗滌器具

有機溶劑的影響，ELISA試劑盒做試劑空白看影響結果

4，衍生化試劑原因（長(cháng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑

5，與曲線(xiàn)好壞相關(guān),，保證曲線(xiàn)的正常