在做ELISA試劑盒實(shí)驗過(guò)程中,難免會(huì )遇到各種不同的問(wèn)題,比如標準曲線(xiàn)不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽(yáng)性,實(shí)驗的重復性不好等等?,F在就來(lái)一一解答用戶(hù)們在實(shí)驗過(guò)程中遇到的各種疑問(wèn)!
ELISA試劑盒曲線(xiàn)問(wèn)題:
1.OD值不正常
試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃
溫度控制不好,控制正確溫度
孵育時(shí)間不準確,控制孵育時(shí)間
洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(cháng)、洗滌次數增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干
陽(yáng)光直射,對著(zhù)風(fēng)直接吹,避風(fēng)避
酶標儀的波長(cháng)錯誤,酶標儀的波長(cháng)450nm
抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體
水質(zhì)問(wèn)題,用娃哈哈礦泉水代替
2.白 板
洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液
少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體
3.無(wú) 梯 度
標準品也污染,換標準品點(diǎn)板
OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次
人為點(diǎn)板,不要點(diǎn)板
4.線(xiàn) 性 不 好
OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次
ELISA試劑盒回收率
1.空白管陽(yáng)性高
樣本本身就是陽(yáng)性樣本,換陰性樣本做回收率
空白管在實(shí)驗中被污染,實(shí)驗中防止交叉污染
水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替
2.偏 高
添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量多,準確的取液吹干
取到其它相層液體,取需用相吹干
復溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復溶液
ELISA試劑盒3.偏 低
添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量少,準確的取液吹干
復溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復溶液
假陰、陽(yáng)性
1,水質(zhì)原因:點(diǎn)復溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替
2,實(shí)驗操作原因
吸取到其它相吹干,準確的取液吹干
離心不*,延長(cháng)離心時(shí)間
樣本的污染,更換樣本
乳化未處理*,溫?。?0℃)處理乳化現象
3,儀器試劑原因
離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具
有機溶劑的影響,ELISA試劑盒做試劑空白看影響結果
4,衍生化試劑原因(長(cháng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑
5,與曲線(xiàn)好壞相關(guān),,保證曲線(xiàn)的正常
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