以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì )，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。ELISA試劑盒37℃是實(shí)驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度．

　　在建立ELISA方法作反應動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)物的天生可達。ELISA試劑盒濕盒應先放在保溫箱中預溫至劃定的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應如斯?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育，有人稱(chēng)之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。這就是為什么ELISA反應老是需要一定時(shí)間的溫育。為加速反應，可進(jìn)步反應的溫度，有些試驗在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。  

　　溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫順4℃等。室溫溫育時(shí)要平置于操縱臺上即可。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點(diǎn)。一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。不管是水浴仍是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA板底應貼著(zhù)水面，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜籠蓋板孔，此時(shí)可讓反應板漂浮在水面上。ELISA試劑盒若用保溫箱，應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上。應留意溫育的溫度和時(shí)間應按劃定力求正確?？乖贵w反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過(guò)夜，以形成zui多的沉淀。室溫溫育的反應，操縱時(shí)的室溫應嚴格限制在劃定的范圍內，尺度室溫溫度是指20～25℃，但詳細操縱時(shí)可根據仿單的要求控制溫育。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如斯。為保證這一點(diǎn)，一個(gè)人操縱時(shí)，一次不宜多于兩塊板同時(shí)測定.。但因所需時(shí)間太長(cháng)，一般不予采用。