ELISA法多年來(lái)廣泛應用于血站和醫院的實(shí)驗室中,相對于其它檢測方法,ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特點(diǎn),并具有操作簡(jiǎn)便、無(wú)放射性危害的優(yōu)點(diǎn),但是在一些測定實(shí)驗中,結果會(huì )出現誤差影響測定結果。這篇文章總結了很多的實(shí)驗經(jīng)驗從幾個(gè)方面分析影響結果的因素。
1 ELISA試劑盒
(1)抗原、抗體活性對效價(jià)的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)降低或失活,結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高,對雜質(zhì)的反應靈敏度也高,實(shí)驗中空白對照OD值偏高或假陽(yáng)性。
(2)酶結合物濃度過(guò)高,也會(huì )導致OD值假性增高。
2 試驗儀器
(1)加樣器是否經(jīng)過(guò)校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不,會(huì )使結果忽高忽低。
(2)每次洗板前,應檢查洗板機針孔有無(wú)堵塞。
3 實(shí)驗操作
(1)檢測前先將ELISA試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏,以免造成試驗結果假性降低。
(2)加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實(shí)驗結果的準確性。
(3)洗滌不充分,會(huì )使結果假性增高,過(guò)分洗滌呈假陰性。
(4)比色時(shí)應保持包被孔底部無(wú)異物、無(wú)水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí),底部留有水汽,應將板底擦干后進(jìn)行比色,水汽或孔內氣泡也會(huì )使OD值升高。
(5)抗原與抗體反應達到*平衡,依賴(lài)于溫度與時(shí)間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落,溫度低于4℃,影響反應速度。
ELISA實(shí)驗的影響因素較多,這就更為嚴格的要求我們在實(shí)驗過(guò)程當中要遵守操作規范,做到細致嚴謹,zui大限度或是杜絕各種因素的影響,從而得到準確無(wú)誤的測定結果,更好的服務(wù)于我們的科研工作。
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