Engvall 和Perlmann于1971年應用將酶附著(zhù)于抗原或者抗體，通過(guò)化學(xué)反應的測定終產(chǎn)物顏色的方法進(jìn)行了IgG的定量測定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）"也就是我們所說(shuō)的即酶聯(lián)免疫吸附試驗，這種固相酶免疫測定方法已經(jīng)在科研領(lǐng)域得到了廣泛的應用。
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但是在具體實(shí)驗過(guò)程中影響因素較多，并且要按照嚴格的說(shuō)明要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯誤結果（即假陽(yáng)性或假陰性結果）。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。

血清是zui常用的ELISA標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽(yáng)性和假陰性結果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：

1． 內源性物質(zhì)
普遍認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有：類(lèi)風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig （s）抗體、交叉反應物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

（1）類(lèi)風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽(yáng)性。解決該情況的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體
ELISA系統中固相一抗和標記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如鼠等）Ig （s） 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig （s） ，但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
（5）醫源性誘導的抗鼠Ig （s） 抗體
臨床開(kāi)展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物咬傷的病人體內也可以產(chǎn)生抗鼠Ig （s） 抗體。這些病人ELISA測定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是：測定抗原時(shí)，在標本中加入足量的正常鼠Ig （s） ，從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
（6）交叉反應物質(zhì)
類(lèi)地高辛、類(lèi)AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時(shí)對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時(shí)，也會(huì )出現假陽(yáng)性結果。
（7）標本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等，均對ELISA測定結果有干擾作用。

2． 外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存不當等原因所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過(guò)久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。
（1）標本溶血
由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標記的ELISA測定中，會(huì )導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本采集時(shí)必須注意避免溶血。
（2）標本受細菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
（3）標本保存不當
在冰箱中保存過(guò)久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性；標本放置時(shí)間過(guò)長(cháng)（如一天以上），有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時(shí)應輕柔，不可強烈振蕩。
（4）標本凝集不全
在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固，18~24h*凝固。臨床檢驗工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結果；這類(lèi)情況于次日復查時(shí)因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復查結果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用，解決的辦法是血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。
（5）標本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統中辣根過(guò)氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
通過(guò)以上的分析和總結，臨床檢驗ELISA測定中出現假陽(yáng)性或假陰性等錯誤的結果，排除ELISA試劑盒因素和操作因素，再有就是從標本因素進(jìn)行分析，并應采取相應措施排除干擾，從而確保檢測結果的準確性。