BCA
蛋白試劑盒是進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測定的常見(jiàn)的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是：蛋白質(zhì)在堿性條件下，可以將二價(jià)Cu2+離子還原成一價(jià)Cu+離子。產(chǎn)生的一價(jià)Cu+離子可以與BCA（Bicinchoninicacid）試劑結合，終生成紫色的復合物。該復合物在562nm處有很強的吸收峰。復合物的多少與蛋白質(zhì)的濃度呈接近的線(xiàn)性關(guān)系。
?一、BCA蛋白試劑盒有許多優(yōu)點(diǎn)：
1、檢測的靈敏度高，檢測的蛋白質(zhì)濃度下限可達20μg/mL。
2、線(xiàn)性范圍廣，在20-2000μg/mL的范圍內，呈接近的線(xiàn)性關(guān)系。
3、兼容性良好，產(chǎn)品可以兼容的化學(xué)物質(zhì)非常廣泛。
二、使用方法：
1、BCA工作液的配制
?。?）BCA工作液總體積的計算：
BCA工作液總體積=（標準品數量+待測樣品數量+1）×重復數×200μL。
舉例：如果標準品數量為8，待測樣品數量1，重復數為3，則BCA工作液總體積=（8+1+1）×3×200μL=6000μL
?。?）BCA工作液的配制：按50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1），充分混勻。
舉例：將5000μL的BCA試劑A與100μL的BCA試劑B混合，得到5100μL的BCA工作液。
2、BSA標準品的配制
將BSA標準品做系列稀釋?zhuān)謩e得到如下9個(gè)不同濃度的標準品：2000μg/mL，1500μg/mL，1000μg/mL，500μg/mL，250μg/mL，125μg/mL，62.5μg/mL，31.25μg/mL，0μg/mL。
注：嚴格的蛋白定量，BSA標準品的稀釋溶液應該與待測蛋白樣品的溶液相同。但是一般情況下，BSA標準品可以直接用0.9%的NaCl、PBS或者去離子水進(jìn)行稀釋。
3、取BSA標準品和待測樣品各25μL到96孔板孔內，
注：正常情況下，樣品與BCA工作液的體積之比應為1:8。如果樣品體積有限，也可使用10μLBSA標準品和待測樣品進(jìn)行檢測（即樣品與BCA工作液的體積之比為1:20），這時(shí)BCA定量試劑盒的檢測范圍較小為125-2000μg/mL。
4、往每孔中加入200μL的BCA工作液，蓋上96孔板蓋子。
5、將96孔板放37℃，30分鐘。
6、用酶標儀測562nm處的光吸收值。
注：562nm為*的光吸收波長(cháng)。如果無(wú)法檢測562nm處的光吸收值，也可以在540～595nm波長(cháng)范圍內檢測光吸收值。
7、根據BSA標準品的光吸收值（扣除空白孔的光吸收值即為終的讀數），繪制標準曲線(xiàn)。依據標準曲線(xiàn)計算待測樣品的蛋白濃度。
