原代組織細胞的解離是從原代組織上獲取單個(gè)細胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作用。盡量縮短用酶處理細胞的時(shí)間，以獲得高的存活率。那么我們該如何解離原代組織細胞呢？

胰酶：

1.先去除無(wú)關(guān)組織，然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過(guò)在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進(jìn)行重懸來(lái)清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復清洗2-3次。

2.將裝有組織碎塊的容器置于冰上，去掉所有上清液。在不含鈣鎂的平衡鹽溶液中加入0.25%胰酶(每100mg組織大約需要1ml 胰酶)。

3.在4℃ 下孵育6-18小時(shí)，使低活性的胰酶盡量滲入組織。

4.緩慢倒掉胰酶。在37℃ 下將殘余的胰酶與組織碎塊共同孵育20-30分鐘。

5.向組織碎塊加入溫熱的*培養基，并輕輕地吹吸以分散組織。如果使用無(wú)血清培養基。還應加入大豆胰酶抑制劑。

6. 用滅菌的不銹鋼網(wǎng)(100-200μm)過(guò)濾細胞懸浮液，直至所有組織*散開(kāi)。計算細胞個(gè)數，然后接種細胞進(jìn)行培養。

膠原酶：

1.用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用Hanks平衡鹽溶液(HBSS)將組織碎塊清洗數次。

2.加入膠原酶(50-200單位/ml膠原酶HBSS)。

3.在37℃ 下孵育4-18小時(shí)。加入3mM CaCl2 可以提高解離效率。

4.用滅菌的不銹鋼網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過(guò)濾細胞懸浮液，將離散的細胞和組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進(jìn)一步解離，可向組織片段中加入新鮮的膠原酶。

5.通過(guò)離心HBSS清洗細胞懸浮液數次。

6.用培養基重懸細胞。計算細胞個(gè)數，然后接種細胞進(jìn)行培養。

分散酶：

1.用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用不含鈣鎂離子的平衡鹽溶液清洗組織碎塊數次。

2.加入分散酶(0.6-2.4單位/ml分散酶不含鈣鎂的平衡鹽溶液)。

3.在37℃下孵育20分鐘至數小時(shí)。

4.用滅菌的不銹鋼網(wǎng)或尼友網(wǎng)過(guò)濾細胞懸浮液，將離散的細胞和組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進(jìn)一步解離，可向組織片段中加入新鮮分散酶。

5.通過(guò)離心平衡鹽溶液清洗細胞懸浮液數次。

6.用培養基重懸細胞。計算細胞個(gè)數，然后接種細胞進(jìn)行培養。

按以上的方法解聚整原代組織細胞，我們就可以獲得大量細胞。