動(dòng)物細胞株大規模培養技術(shù)是指以生物反應器培養細胞為基礎,實(shí)現動(dòng)物細胞工業(yè)化和規?;a(chǎn),用于生產(chǎn)疫苗、單抗等生物制品。為提升生物制品的生產(chǎn)效率,保證產(chǎn)品質(zhì)量,動(dòng)物細胞大規模培養過(guò)程工藝需考慮高表達工程細胞系、個(gè)性化細胞培養基的應用、生物反應器工藝優(yōu)化等。
目前,上千升規模的生物反應器做國內應用也越來(lái)越廣泛,如何實(shí)現生產(chǎn)工藝放大是首先要考慮的,涉及生物反應器高徑比,剪切力(通氣方式、槳葉設計),通氣獲得DO效率(與攪拌系統、通氣方式、氣體流量),積累CO2的排出等內容,而這些因素往往是非線(xiàn)性放大的,這與生物反應器設備的設計、放大的關(guān)系為密切。DO、pH、Temp、培養基流加策略等則是線(xiàn)性放大的。生物反應器工藝放大的困難往往在于這些非線(xiàn)性放大因素。
關(guān)于動(dòng)物細胞株工藝開(kāi)發(fā),有幾條經(jīng)驗可考慮:
1、pH控制
高pH值的培養條件,即偏堿環(huán)境更容易導致乳酸生成。在流加培養時(shí),可根據葡萄糖消耗速率添加葡萄糖,一般控制培養液中的葡萄糖濃度高于1-2.5g/L。同時(shí)控制合適的DO濃度,DO不足時(shí)細胞無(wú)氧代謝,不走TCA循環(huán),導致乳酸產(chǎn)生。在不補加堿液的時(shí)候,pH的變化,一定程度上也可用于細胞生長(cháng)狀態(tài)的評價(jià)。
2、DO控制
細胞從接種到收獲,隨著(zhù)細胞密度或細胞狀態(tài)的變化,對溶氧的需求是一個(gè)由弱到強,再至穩定,然后減少的變化過(guò)程?;谝欢毎芏认碌娜苎跸乃俾?,是衡量細胞生長(cháng)、細胞代謝,甚至是細胞生理狀態(tài)的重要指標。DO值的高低,能影響蛋白的糖基化等轉錄后修飾。
3、CO2排出
在高密度培養細胞時(shí),反應器內CO2的積累往往成為一個(gè)問(wèn)題,其通過(guò)影響培養環(huán)境的pH值、滲透壓對培養過(guò)程產(chǎn)生影響。小孔徑的通氣管,能提高通氣效率,但排CO2效率低;而大孔徑的通氣管,通氣效率降低,但驅趕CO2效果好。所以在生物反應器設計時(shí),需要綜合考慮。