我們在ELISA試劑盒實(shí)驗中，多多少少都會(huì )遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應導致的結果。

    那么什么是基質(zhì)效應呢？

    首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會(huì )對分析過(guò)程有顯著(zhù)干擾，影響分析結果的準確性。業(yè)內把這些影響統稱(chēng)為基質(zhì)效應。這是ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的雷。

    如何判斷是否是基質(zhì)效應呢？

    當單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí)，可能是實(shí)驗操作出現問(wèn)題，這時(shí)應增加重復，進(jìn)步操作技術(shù)。當許多樣本都低于空白值時(shí)，應思考基質(zhì)效應的影響，建立校正曲線(xiàn)予以修改?；|(zhì)效應的原因錯綜復雜，有可能

是樣品中存在的基質(zhì)導致原抗體的聯(lián)絡(luò )結合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現象。導致樣本值無(wú)法計算出數值，或許數值為負。

    雖然原因復雜，但有方法可以用來(lái)評估基質(zhì)效應。

    種方法是采用線(xiàn)性稀釋?zhuān)话銇?lái)講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結合作用很強，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結合，而造成基質(zhì)效應的非特異結合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結合造成的干

擾會(huì )逐步減少，測量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應時(shí)，稀釋會(huì )造成非特異性結合比例的減少，測量值也相應地產(chǎn)生很大改變。

    第二種方法是摻入回收率實(shí)驗，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現?；厥章式橛?0-120%，才符合標準。

    那我們如何避免ELISA實(shí)驗中基質(zhì)效應？

    基質(zhì)效應可以通過(guò)產(chǎn)品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。上海通蔚生物科技針對ELISA產(chǎn)品研發(fā)進(jìn)行了多種優(yōu)化。ELISA試劑盒在開(kāi)發(fā)進(jìn)程中，標準品不選用人或動(dòng)物血清、血漿作為標準曲線(xiàn)的稀釋液，只能選用其仿照物。我們量身定制的緩沖液系統，這些優(yōu)化后的緩沖液體系能很好消除基質(zhì)效應。還有當檢測某個(gè)分析物時(shí)，其他相關(guān)因子或類(lèi)似結構因子如果有非特異性結合，也會(huì )導致基質(zhì)效應，我們也因此做了大量的交叉反應，確保沒(méi)有明顯的交叉反應和干擾。而且我們試劑盒必須通過(guò)嚴格的基質(zhì)效應測試，全部包括線(xiàn)性稀釋和摻入回收率實(shí)驗，并把測試結果記錄在說(shuō)明書(shū)中。