ELISA試劑盒即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標準化等優(yōu)點(diǎn)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗中血清的具體處理保存意見(jiàn):
(1)要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長(cháng),其所分泌的一些酶可能會(huì )對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì )對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清標本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(cháng)時(shí)間保存,應在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
(5)標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應離心沉淀后取上清檢測。
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