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                              細胞培養領(lǐng)域
                              更新時(shí)間:2015-08-03   點(diǎn)擊次數:1887次

                              一、無(wú)血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。 
                              用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細胞在體外培養時(shí),多數呈貼壁生長(cháng)或兼性貼壁生長(cháng);而當其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養基中生長(cháng)時(shí),由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細胞往往以懸浮形式生長(cháng)。 
                              添加組分包括以下幾大類(lèi)物質(zhì)
                              (1)促貼壁物質(zhì):許多細胞必須貼壁才能生長(cháng),這種情況下無(wú)血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著(zhù)重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞等。 
                              (2)促生長(cháng)因子及激素:針對不同細胞添加不同的生長(cháng)因子。激素也是刺激細胞生長(cháng)、維持細胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細胞*的,如胰島素。 
                              (3)酶抑制劑:培養貼壁生長(cháng)的細胞,需要用胰酶消化傳代,在無(wú)血清培養基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。zui常用的是大豆胰酶;抑制劑。 
                              (4)結合蛋白和轉運蛋白:常見(jiàn)如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大,可增加培養基的粘度,保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養的無(wú)血清培養基都含有牛血清白蛋白。 
                              (5)微量元素:硒是zui常見(jiàn)的。 
                              二、使用方法:目前,血清仍是動(dòng)物細胞培養中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養或者細胞生長(cháng)狀況不良時(shí),常常會(huì )先使用有血清的培養液進(jìn)行培養,待細胞生長(cháng)旺盛以后,再換成無(wú)血清培養液。細胞轉入無(wú)血清培養基培養要有一個(gè)適應過(guò)程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無(wú)血清培養。在降低過(guò)程中要注意觀(guān)察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實(shí)驗后這些細胞一般不再繼續保留,很少有細胞能夠長(cháng)期培養于無(wú)血清培養基而不發(fā)生改變的。細胞轉入無(wú)血清培養之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規培養于含血清的培養基中,以保證細胞的特性不發(fā)生變化。 
                              為了使細胞適應無(wú)血清培養,關(guān)鍵的是使所培養細胞: 
                              ●處于對數生長(cháng)中期 
                              ●>90% 活細胞率 
                              ●適應時(shí)以較高的起始細胞接種 

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