在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育（incubation），有人稱(chēng)之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。ELISA試劑盒屬固相，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。

   以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì )，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點(diǎn)。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。

洗滌： 
   洗滌在ELISA試劑盒過(guò)程中雖不是一個(gè)反應步驟，但卻也決定著(zhù)實(shí)驗的成敗。ELISA試劑盒就是靠洗滌來(lái)達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結合的物質(zhì)，以及在反應過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

   聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)?？梢哉f(shuō)在ELISA試劑盒操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA試劑盒儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種
顯色和比色