因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時(shí)，ELISA試劑盒應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類(lèi)試劑可削弱鉤狀效應。在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成"夾心復合物"。類(lèi)同于沉淀反應中抗原過(guò)剩的后帶現象，此時(shí)反應后顯色的吸光值(位于抗原過(guò)剩帶上)與標準曲線(xiàn)(位于抗體過(guò)剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見(jiàn)1.3.2，圖1-4)，人ELISA試劑盒如按常法測讀，所得結果將低于實(shí)際的含量，這種現象被稱(chēng)為鉤狀效應(hook effect)，因為標準曲線(xiàn)到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時(shí)，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。

    假使在被測分子的不同位點(diǎn)上含有多個(gè)相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問(wèn)題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(gè)亞型，人ELISA試劑盒雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問(wèn)題。用化學(xué)方法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質(zhì)和糖等多種類(lèi)型的大小分子形成生物素標記產(chǎn)物，標記方法頗為簡(jiǎn)便。生物素與親和素的結合具有很強的特異性，其親和力較抗原抗體反應大得多，兩者一經(jīng)結合就極為穩定。

    由于一個(gè)親和素可與4個(gè)生物素分子結合，因此如把ABS與人ELISA試劑盒法可分為酶標記親和素-生物素(LAB)法和橋聯(lián)親和素-生物素(ABC)法兩種類(lèi)型。兩者均以生物素標記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統中。在LAB中，固相生物素先與不標記的親和素反應，然后再加酶標記的生物素以進(jìn)一步提高敏感度。在早期，親和素從蛋清中提取，這種卵親和素為堿性糖蛋白，與聚苯乙烯載體的吸附性很強，用于ELISA試劑盒中可使本底增高。從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無(wú)此缺點(diǎn)，在人ELISA試劑盒應用中有替代前者的趨勢。由于A(yíng)BS-ELISA較普通人ELISA試劑盒多用了兩種試劑，增加了操，在臨床檢驗中ABS-ELISA試劑盒應用不多。