在實(shí)驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，計算S/N值。也有寫(xiě)作P/N的，這里的P不代表陽(yáng)性（positive），而是?。╬atient）的縮寫(xiě)，不應誤解。為避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽(yáng)性標準，現多為各種測定所沿用。

    實(shí)際上每一測定系統應該用實(shí)驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽(yáng)性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個(gè)特定的常數，以此作為判斷結果陽(yáng)性或陰性的標準。ELISA試劑盒用此法判斷結果要求實(shí)驗條件十分恒定，陽(yáng)性和陰性的對照品應符合一定的規格，須配用精密的儀器，并嚴格按規定操作。陽(yáng)性判定值公式中的常數是在這特定的系統中通過(guò)對大量標本的實(shí)驗檢測而得到的。

    現舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，陽(yáng)性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml。每次試驗設2個(gè)陽(yáng)性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均數（NCX）和陽(yáng)性對照A值的平均數（PCX），兩個(gè)平均數的差（P-N）必須大于一個(gè)特定的數值（例0.400），試驗才有效。3個(gè)陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對照重新計算NCX；如有兩個(gè)陰性對照A值超出以上范圍，則該次實(shí)驗無(wú)效。陽(yáng)性判定值按下式計算： 
    陽(yáng)性判定值=NCX+0.05 標本A值＞陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性判定值的為陰性。應注意的是，式中0.05為該試劑盒的常數，只適合于該特定條件下，ELISA試劑盒而不是對各種試劑均可通用。