這些抗體就會(huì )與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結合物，經(jīng)第二次孵育后，ELISA檢測試劑盒酶結合物就會(huì )與*次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì )發(fā)生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會(huì )發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長(cháng): 450nm處測量O.D.值,(一) 基本原理ELISA檢測試劑盒方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結合，此種結合不會(huì )改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶。

    此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，ELISA檢測試劑盒出現顏色反應。因此，可通過(guò)底物的顏色反應來(lái)判定有無(wú)相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。

    此種顯色反應可通過(guò)ELISA檢測試劑盒儀進(jìn)行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。