因為標準曲線(xiàn)到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時(shí)，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等時(shí)，應注意可測范圍的zui高值。ELISA檢測試劑盒用高親和力的單克隆抗體制備此類(lèi)試劑可削弱鉤狀效應。
    假使在被測分子的不同位點(diǎn)上含有多個(gè)相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問(wèn)題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(gè)亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問(wèn)題。
    雙抗體夾心法測抗原的另一注意點(diǎn)是類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動(dòng)物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時(shí)與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽(yáng)性反應。ELISA檢測試劑盒采用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由于去除了Fc段，從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類(lèi)試劑的一項考核指標（參見(jiàn)6.2）。
    雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。在測定時(shí)，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過(guò)反應而結合在固相載體上。

    此時(shí)固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，ELISA檢測試劑盒故可根據呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
2.　ELISA檢測試劑盒的類(lèi)型
ELISA檢測試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體，稱(chēng)為"結合物"（conjugate）；（3）酶反應的底物。ELISA檢測試劑盒根據試劑的來(lái)源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類(lèi)型的檢測方法。