其后通過(guò)抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，人ELISA試劑盒包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。

方法二 用于檢測未知抗體的間接法： 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。
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人ELISA試劑盒加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被的反應孔
中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對照)
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于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，
37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

   將抗原或抗體固定在過(guò)程稱(chēng)為包被。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過(guò)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、人ELISA試劑盒濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，因此更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯(lián)結多發(fā)生在Fc段上，抗體結合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。