ELISA試劑盒免疫酶技術(shù)是什么？
免疫酶技術(shù)就是用酶(如辣根過(guò)氧化物酶)標記已知抗體(或抗原)，然后與組織標本在一定條件下反應，如果組織中含有相應抗原(或抗體)，抗原抗體相互結合形成的復合物中所帶酶分子遇到底物時(shí)，能催化底物水解、氧化或還原，產(chǎn)生顯色反應，這樣就可以識別出標本抗原(抗體)分布的位置和性質(zhì)，通過(guò)圖像分析并可達到定量的目的。
ELISA試劑盒免疫酶技術(shù)與免疫熒光技術(shù)
免疫熒光技術(shù)雖已廣泛應用于免疫學(xué)的研究與診斷，但是熒光抗體染色標本不能長(cháng)期保存，對組織細胞的細微結構分辨不清，免疫酶技術(shù)則能克服上述不足，標記免疫酶技術(shù)的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法，對石蠟切片標本尤為適用，為免疫病理研究開(kāi)辟了一條新途徑，酶顯色產(chǎn)物具有較高的電子密度，經(jīng)過(guò)適當處理還可以進(jìn)行免疫電鏡觀(guān)察，免疫酶組化技術(shù)分為酶標記法與非標記抗體技術(shù)，前者是將酶通過(guò)交聯(lián)劑結合在抗體分子上，形成酶標記抗體。后者是將酶作為抗原與相應的特異性抗體連接進(jìn)行的免疫反應，稱(chēng)為非標記抗體酶技術(shù)。
免疫酶技術(shù)利用酶催化底物反應的生物放大作用，提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應檢測敏感性的一種標記免疫技術(shù)。該技術(shù)所用的酶要求純度高、催化反應的轉化率高、專(zhuān)一性強、性質(zhì)穩定、來(lái)源豐富、價(jià)格不貴、制備成的酶標抗體或抗原性質(zhì)穩定，繼續保留著(zhù)它的活性部分和催化能力。在受檢標本中不存在與標記酶相同的酶。另外它的相應底物應易于制備和保存，價(jià)格低廉，有色產(chǎn)物易于測定，光吸收高。
ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)
免疫酶技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和與標記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應底物?？勺鞴滔噍d體的物質(zhì)很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式，在測定過(guò)程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué)反應，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。
聚苯乙烯載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應板。小試管的特點(diǎn)是還能兼作反應的容器，zui后放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器，在洗滌過(guò)程中使圓珠滾動(dòng)淋洗，效果更好。zui常用的載體為微量反應板，于ELISA測定的產(chǎn)品也稱(chēng)為ELISA板，通用的標準板形是8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測，有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標準ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標本的檢測，并可在特定的比色計上迅速讀出結果?，F在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反應板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標準化極為有利。
良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng／ml）包被ELISA板各孔后，每孔內加入適當稀釋的酶標抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后分別測每孔溶液的吸光度?？刂品磻獥l件，使各讀數在0.8左右。計算所有讀數的平均值。所有單個(gè)讀數與平均讀數之差應小于10%.與聚苯乙烯類(lèi)似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可切割，價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時(shí)也略高。
為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣，可用以下方法加以檢驗：用其他免疫學(xué)測定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標本和一個(gè)典型的陰性標本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預定的ELISA操作步驟進(jìn)行測定，然后比較測定結果。在哪一種載體上陽(yáng)性結果與陰性結果判別zui大，這種載體就是這一ELISA測定的zui合適的固相載體。
除塑料制品外，固相酶免疫測定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜，如**纖維素膜、尼龍膜等，這類(lèi)測定形式將在本章“膜載體的酶免疫測定”中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的，反應時(shí)固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反應的速率，反應結束后用磁鐵吸引作為分離的手段，洗滌也十分方便，但需配備特殊的儀器。