ELISA試劑盒大起底

從樣品中分離提純同種試劑盒，是許多下游應用的關(guān)鍵一步，分離得到的細胞可以用于基因鑒定、大鼠小鼠ELISA試劑盒計數、生化分析、蛋白分離、宿主-病原體互作以及細胞間相互作用等研究。

一款合適的分離試劑盒可以說(shuō)是實(shí)驗成功的保障，因為只有獲得正確的ELISA試劑盒，下游的分析結果才可能準確。目前，市面上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇，它們的主要區別在于分離方法和篩選標志。那么，如何選擇自己的細胞分離試劑盒呢？希望本文能為你提供一些幫助。
正向選擇VS負向選擇
試劑盒分離試劑盒的工作原理主要有兩種，正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒直接結合的抗體來(lái)進(jìn)行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連，可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-復合物提取出來(lái)，再通過(guò)二抗將磁珠與目標分開(kāi)。負向選擇的試劑盒也采用類(lèi)似的抗體包被磁珠，不過(guò)這種試劑盒是通過(guò)去除樣品中的非目的，來(lái)間接捕獲目的。
這兩種細胞分離試劑盒如何取舍，主要取決于目標細胞的表面是否具有特異性強的篩選標志。這樣的篩選標志能夠實(shí)現特異性的捕獲，避免所獲得的細胞被非目標細胞污染。如果你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標志，那么正向選擇的細胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標細胞并不具有特異性強的篩選標志，那我們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。
篩選標志的確定
通過(guò)PubMed等數據庫中的文獻，我們一般可以確定在目標上表達的篩選標志。如果文獻中找不到適合自己的表面標志，我們還可以用目標的DNA序列進(jìn)行BLAST搜索。BLAST搜索結果會(huì )顯示，目標細胞上可能表達的表面標志，在此基礎上可以選取用于捕獲的細胞表面蛋白。舉例來(lái)說(shuō)，對一個(gè)T進(jìn)行BLAST搜索，結果會(huì )顯示該是否表達CD4或CD8。在得知目標表達CD4之后，我們可以先對樣品進(jìn)行一個(gè)免疫實(shí)驗（如ELISA），以檢驗BLAST搜索的結果。一旦證實(shí)目標的確表達CD4，我們就可以用相應試劑盒來(lái)篩選CD4陽(yáng)性的T細胞。
一般流程
對于一個(gè)旨在分離CD4陽(yáng)性T的試劑盒來(lái)說(shuō)小鼠ELISA試劑盒，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育，使抗體與CD4+ T結合。然后洗去不需要的非目標（即不表達CD4的），留下磁珠-抗體-復合物。ELISA試劑盒將上述復合物與能結合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗體-二抗復合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物，而所有的CD4+細胞留在上清中。zui后，只需將上清轉移就可以進(jìn)行下游研究了。