本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：

VEGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗（ELISA）.已知VEGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進(jìn)行檢測。先將VEGF和生物素標記的抗體同時(shí)溫育。人血管內皮生長(cháng)因子ELISA 檢測試劑盒洗滌后，加入親和素標記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中VEGF的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

人血管內皮生長(cháng)因子ELISA 檢測試劑盒安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實(shí)驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

1． 試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄，不可保存。

2． 實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標板時(shí)應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7． 底物A應揮發(fā)，避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感，避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。

9． 按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過(guò)程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

標準品：標準品的系列稀釋?xiě)趯?shí)驗時(shí)準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

1． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個(gè)標準品和空白孔建議做復孔。每個(gè)樣品根據自己的數量來(lái)定，能使用復孔的盡量做復孔。

3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4． 甩去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9． 在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

局限

6號標準品以上的結果為非線(xiàn)性的，根據此標準曲線(xiàn)無(wú)法得到的結果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線(xiàn)性。樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長(cháng)450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的VEGF標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線(xiàn)，樣品的VEGF含量可根據其OD值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-40ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml

人血管內皮生長(cháng)因子ELISA 檢測試劑盒beta-Amyloid（35-42）  β淀粉樣肽/Aβ42抗體 X47455  0.1ml
ER α  雌激素受體α抗體 X47456  0.1ml
CKLFSF2/CMTM2  趨化素樣因子超家族成員2抗體 X47457  0.2ml
COX7A2  細胞色素c氧化酶VIIA亞型2抗體 X47458  0.1ml
CKLFSF2 isoform 1  趨化素樣因子超家族成員2亞型1抗體 X47459  0.2ml
MAP65/ASE 1  擬南芥MAP65蛋白抗體 X47460  0.2ml
Streptavidin/SA protein  鏈酶親和素抗體 X47461  0.1ml
human Serum IgA  人血清型免疫球蛋白A抗體 X47462  0.2ml
ETFA  電子轉移黃素蛋白α抗體 X47463  0.2ml
γ-taxilin/LSR5  脂多糖相關(guān)反應蛋白5抗體 X47464  0.2ml
T4/L-Thyroxine  甲狀腺素T4抗體 X47465  0.2ml
HLA G（N-Terminus）  人類(lèi)白細胞抗原G抗體（N端） X47466  0.1ml
HLA G（C-terminal）  人類(lèi)白細胞抗原G抗體（C端） X47467  0.1ml
hemagglutinin protein/H  麻疹病毒血凝素抗體 X47468  0.2ml
WIG-1/PAG608  野生型P53誘導基因1抗體 X47469  0.1ml
CD71/TFR/Transferrin receptor  轉鐵蛋白受體抗體 X47470  0.1ml
GAPDH（3E12）-Loading Control  3-磷酸醛脫氫酶單克隆抗體（內參抗體） X47471  0.1ml
GAPDH   3-磷酸醛脫氫酶抗體（內參抗體） X47472  0.1ml
beta-Actin （Loading Control）  β-肌動(dòng)蛋白抗體（內參抗體） X47473  0.1ml
14-3-3（Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon）  14-3-3蛋白抗體 X47474  0.1ml
phospho-14-3-3 protein zeta/delta（Ser58）  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 X47475  0.1ml