ELISA試劑盒有著(zhù)準確性高、靈敏度高、特異性強的諸多優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)驗室的應用已經(jīng)相當普及，絕大多數是用于檢測未知樣本中抗原的濃度?，F在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口，數量繁多令人目不暇接，而且質(zhì)量也是參差不齊，那么我們怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢？首先要根據我們所要檢測的分子進(jìn)行檢測，除此以外也還有一些需要加以考量的因素，下面就為大家提供幾點(diǎn)參考。

1. 實(shí)驗類(lèi)型

ELISA試劑盒有多種類(lèi)型，不過(guò)它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類(lèi)型，In-cell ELISA需要將微孔板中培養的細胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養細胞，然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，我們還需要根據自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗。

通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過(guò)有時(shí)候雙抗夾心法并不是*選擇，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著(zhù)，又或者抗體只有一個(gè)抗體結合位點(diǎn)。在上述情況下，競爭性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標記的純化抗原與樣本中無(wú)標記的抗原進(jìn)行競爭，以結合捕獲抗體。

2. 抗體類(lèi)型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點(diǎn)，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會(huì )對實(shí)驗結果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問(wèn)題，我們可以選擇購買(mǎi)“matched pair”的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過(guò)驗證才推薦的好組合。

3. 交叉反應

如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應就會(huì )影響整個(gè)實(shí)驗的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應的一個(gè)因素。盡管現在購買(mǎi)源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易，我們仍有必要確認一下是否會(huì )產(chǎn)生交叉反應的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時(shí)，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應。如果檢測用二抗與捕獲抗體結合，實(shí)驗特異性就會(huì )大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來(lái)避免上述問(wèn)題。

與此同時(shí)，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測結果收到影響。

4. 檢測方式

如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應的可溶性產(chǎn)物，抗體上結合有相應的酶（例如通常使用的辣根過(guò)氧化物酶HRP），而反應體系中添加有相應的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反應生成具有特征性的顏色，可以通過(guò)分光光度計進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結合在一抗上，也可以結合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合。此外ELISA的結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。

　　上述四點(diǎn)涵蓋的問(wèn)題就已經(jīng)很多了，如果您對考慮購買(mǎi)的ELISA試劑盒還有任何疑問(wèn)，都可以直接向商家咨詢(xún)。各大商家的上也有相應的技術(shù)資料提供，可以從中獲取有價(jià)值的產(chǎn)品信息。