梅毒螺旋體抗體檢測作為輸血安全的必測指標，其試驗方法與試劑的選擇尤為重要，ELISA法篩檢梅毒抗體是目前普遍采用的方法，有關(guān)梅毒抗體ELISA試劑盒的評價(jià)報道較多，但多為靈敏度或特異度等少數評價(jià)指標 ［1，2］ 為了全面客觀(guān)地評價(jià)ELISA方法對無(wú)償獻血者梅毒抗體的篩檢價(jià)值，ELISA試劑盒篩檢的真實(shí)性和可靠性，筆者對我們常用的兩種篩檢試劑盒的檢測真實(shí)性、可靠性及Cut-off值的合理性進(jìn)行評價(jià)，現報告如下。

1 材料與方法
1.1 材料 梅毒抗體血清盤(pán)血清40份（購自衛生部臨床檢驗中心，批號:200103，其中陽(yáng)性22份，陰性18份），另外隨機抽取西安市有代表性的無(wú)償獻血者梅毒抗體陰性血清100人份。梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒分別由上海伊麗薩生物科技有限公司（以下稱(chēng)ELISA1）和美國諾泰公司（以下稱(chēng)ELISA2）提供。

1.2 方法
1.2.1 抽樣方法
將2003年1～5月西安市某血液中心無(wú)償獻血者梅毒抗體陰性血清標本按順序、年齡、職業(yè)、文化程度分層，再按隨機表中隨機數字抽樣，分層特征比例按該血液中心前3年無(wú)償獻血者以上分層特征構成比例進(jìn)行，抽滿(mǎn)100例為止。
1.2.2 盲法篩檢
由評價(jià)監督者對考核血清盤(pán)重新編密碼，由2名操作熟練的專(zhuān)業(yè)檢驗人員對編碼血清盤(pán)用上述2種試劑盒進(jìn)行盲法檢測，操作嚴格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，篩檢結果由全自動(dòng)酶標儀自動(dòng)打印OD值及陰、陽(yáng)性結果。為考核試劑盒的可靠性，由2名以上專(zhuān)業(yè)檢驗人員在條件*相同的情況下，對考核血清盤(pán)40份血清進(jìn)行第二次盲法篩檢，第二次篩檢前重新編密碼，結果判讀后再打開(kāi)密碼，核對結果。
1.2.3 金標準的確定
衛生部臨床檢驗中心梅毒抗體血清盤(pán)已知陽(yáng)性與陰性為金標準。
1.2.4 其實(shí)性評價(jià)
將40份血清盤(pán)標本分為梅毒抗體陽(yáng)性與陰性組，再將篩檢試劑盒的篩檢結果分為梅毒抗體陽(yáng)性與陰性組，分組數據匯入篩檢與診斷試驗評價(jià)四格表，用分式 ［3］ 分別計算出真實(shí)性評價(jià)的8個(gè)指標，即靈敏度、特異度、假陽(yáng)性率、假陰性率、陽(yáng)性預告值、陰性預告值、準確度及約登指數。
1.2.5 可靠性評價(jià)
將40份血清盤(pán)樣本*次與第二次篩檢結果，分別匯入四格表，分別計算出各試劑盒重復試驗的符合率與卡帕值，卡帕值的判定標準按Fleiss提出的3級劃分標準評價(jià)，即0.75～1.00為符合很好，0.4～0.74為一般符合，0.01～0.39為缺乏符合 ［3］ 。
1.2.6 Cut-off值評價(jià)方法
為了評價(jià)兩種試劑盒截斷點(diǎn)或臨界值的合理性，將考核血清盤(pán)中18份陰性血清及隨機抽取的西安市無(wú)償獻血者梅毒抗體陰性血清100人份測量出的OD值編制頻數分布表，按篩檢試驗正常值范圍確定方法 ［4］ ，分別用統計學(xué)界限的正態(tài)分布法及百分位數法計算出每種試劑盒的Cut-off值，并與按試劑盒說(shuō)明書(shū)規定計算出的Cut-off值比較，結合陰性、陽(yáng)性OD值頻數分布特點(diǎn)，分析評價(jià)其合理性。

2 結果
2.1 對考核血清篩檢結果 在已知22份陽(yáng)性中，ELISA1篩檢出21份，ELISA2篩檢出22份，在已知18份陰性標本中，ELISA1與ELISA2均檢出17份。
2.2 真實(shí)性評價(jià) 利用兩種試劑盒的篩檢結果，計算出評價(jià)真實(shí)性的8個(gè)指標。
2.3 可靠性評價(jià) ELISA1與ELISA2兩次重復檢出的陽(yáng)性份數相同，重復試驗的符合率均為100%，卡帕值均為1.00。
2.4 Cut-off值的評價(jià)
依據ELISA1與ELISA2試劑盒對考核血清盤(pán)18份陰性血清及100份西安市無(wú)償獻血者梅 毒抗體陰性血清測量的OD值，用統計學(xué)界限的正態(tài)分布法與百分位數法分別計算其Cut-off值，按兩種ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)規定方法分別計算出zui低Cut-off值，并將3種Cut-off值進(jìn)行比較。結果發(fā)現，按規范的正態(tài)分布法與百分位數法計算出的Cut-off值均遠低于試劑盒說(shuō)明書(shū)規定的Cut-offzui小值，但結合140份無(wú)償獻血者陽(yáng)性與陰性OD值實(shí)際頻率分布特點(diǎn)分析，試劑盒規定的截斷點(diǎn)是合理的，如果按統計界限計算的Cut-off值判讀，并不能提高試劑盒的靈敏度，反而會(huì )使假陽(yáng)性率升高。

ELISA1及ELISA2的靈敏度分別為95.5%，100.0%，特異度分別為94.4%，94.4%，約登指數分別為0.90，0.94，兩種試劑的重復符合率均為100.0%，兩種試劑的Cut-off值是合理的。

3 討論
評價(jià)某項篩檢試驗需要有一個(gè)*的客觀(guān)性強的金標準，衛生部臨床檢驗中心的梅毒抗體考核血清盤(pán)樣本來(lái)自獻血人群，陰、陽(yáng)性界限清楚，含有梅毒抗體多種效價(jià)的血清，客觀(guān)性強，是*的金標準。對于篩檢試驗的評價(jià)不僅要評價(jià)靈敏度、特異度，還需評價(jià)約登指數等多項綜合性指標及可靠性指標，而且還需要對試劑盒陰性與陽(yáng)性的截斷點(diǎn)（Cut-off值）的合理性進(jìn)行評價(jià)。