●ELISA試劑盒是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實(shí)驗診斷方法,由于其試劑穩定、易保存、操作簡(jiǎn)便、結果判斷較客觀(guān)等因素,以及既適宜于大規模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應用于微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、腫瘤學(xué)和細胞因子等領(lǐng)域。ELISA試劑盒的影響因素較多,加強質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。
分析前質(zhì)控
●人員培訓 實(shí)驗是***作的,因此檢驗人員需經(jīng)過(guò)培訓,熟練掌握本專(zhuān)業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識:
◎檢驗項目的基本原理 (ELISA試劑盒原理);
◎臨床意義;
◎熟悉檢測技巧,了解易出差錯的環(huán)節及難點(diǎn);
◎熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成,包被片段及其組成);
◎ 熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數據處理的能力和質(zhì)量控制知識。
◎某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門(mén)組織的專(zhuān)門(mén)培訓班,考試合格后持證上崗。
分析前質(zhì)控
1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應用于臨床檢驗發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
特點(diǎn) :在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"
酶標記免疫活性物質(zhì),進(jìn)行信號放大;
有二步溫育反應二次洗滌過(guò)程;
靈敏度特異性相對較高。
局限性:只能檢測到ng水平
精密度差(批內CV15-20%);
線(xiàn)性范圍窄(一個(gè)數量級);
存在"HD-HOOK"效應。
ELISA試劑盒原理
●根據檢測目的和操作步驟不同有三種基本方法。
●雙抗體(原)夾心法 檢測抗原(體)的常見(jiàn)方法,應用針對抗原兩個(gè)不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價(jià)以上抗原,不能測 小分子半抗原)。
●間接法 檢測抗體的方法,利用酶標記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結合的抗體。
●競爭法 檢測抗原或小分子半抗原、抗體,以測抗原為例,使待測抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合,結果如待測抗原含量越多,與固相抗體結合的酶標抗原就越少,顯色越淺,二者呈負相關(guān)。
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