簡(jiǎn)單介紹在ELISA實(shí)驗中對不同類(lèi)型樣本的處理方法，ELISA實(shí)驗中正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步。

1、血漿

ELISA實(shí)驗用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融，避免使用溶血或高血脂的標本。

2、 細胞培養上清

 取細胞培養上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。)

3、 細胞裂解液

 (1)吸去培養板內的培養基，用yi酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來(lái)。(懸浮細胞可省略)

 (2)收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。

 (3)加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個(gè)孔的細胞量需要150~250μL      PBS重懸。

 (4)將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。

 (5)4℃10000×g離心10min，除去細胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。)

 4、 血清

血清是常用于ELISA檢測的一類(lèi)樣本，處理比較簡(jiǎn)單。用無(wú)熱原、無(wú)內毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一晚上，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清大程度的析出)。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

小結： ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，故應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。為保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本盡量在1~6個(gè)月內進(jìn)行檢測；4℃保存的樣本應在1周內進(jìn)行檢測。(保證樣本不含NaN3，NaN3會(huì )抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。)