PCR檢測試劑盒方法的步驟分析：

(1)、產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線(xiàn)。

(2)、待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線(xiàn)計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線(xiàn)。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。

其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線(xiàn)法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。

步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線(xiàn)計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規待測目的基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

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