質(zhì)粒純度不高解決辦法

1.混有蛋白：不要使用過(guò)多菌體。經(jīng)溶液P1、P2、P3處理，離心后溶液應為澄清的，如果還混有微小蛋白懸浮物可再次離心去除后再進(jìn)行下一步驟。

2. 混有RNA：RNaseA處理不干凈，請減少菌體用量或加入溶液P3之后室溫放置一段時(shí)間。如果溶液P1已保存6個(gè)月以上，請在溶液P1中添加RNaseA。

3. 混有基因組DNA：加入溶液P2和P3后應溫和混勻，如果劇烈振蕩，可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質(zhì)粒中。如果加入溶液P2后過(guò)于粘稠，無(wú)法溫和混勻，請減少菌體用量。細菌培養時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )導致細胞和DNA的降解，培養時(shí)間不要超過(guò)16小時(shí)。

4. P3溶液加入時(shí)間過(guò)長(cháng)：P3溶液加入后，放置時(shí)間不要太長(cháng)，否則有可能會(huì )產(chǎn)生小片段DNA污染。

5. 含大量核酸酶的宿主菌：宿主菌含大量核酸酶，在質(zhì)粒提取過(guò)程中降解質(zhì)粒DNA，影響提取質(zhì)粒DNA的完整性，/好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌。

6. 質(zhì)粒的二聚體和多聚體形式：質(zhì)粒復制過(guò)程中形成的，與宿主菌相關(guān)，電泳可檢測出多條條帶，單酶切處理后可變成單一條帶。

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