上海通蔚生物ELISA試劑盒有著(zhù)準確性高、靈敏度高、特異性強的許多長(cháng)處，在試驗室的應用現已適當普及，絕大多數是用于檢測不知道樣本中抗原的濃度?，F在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口，數量繁復令人目不暇接，并且質(zhì)量也是良莠不齊，那么我們怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢？首先要依據我們所要檢測的分子進(jìn)行檢測，除此以外也還有一些需求加以考量的要素，下面就為我們供給幾點(diǎn)參考。

1. 抗體類(lèi)型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結合作用更好。例如，關(guān)于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有協(xié)助。多抗能夠保證捕獲一切抗原，隨后單抗再特異性檢測具有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有考究。咱們不期望捕獲抗體與檢測抗體競賽抗原上的同一位點(diǎn)，為此咱們就需求保證捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在堆疊。假如捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會(huì )對試驗成果發(fā)生較大影響。要防止這一問(wèn)題，咱們能夠挑選購買(mǎi)“matched pair"的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過(guò)驗證才引薦的好組合。

2. 穿插反響

假如抗體間發(fā)生沖突或穿插反響就會(huì )影響整個(gè)試驗的特異性。其間抗體來(lái)歷所帶來(lái)的兼容性就是穿插反響的一個(gè)要素。雖然現在購買(mǎi)源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易，咱們仍有必要承認一下是否會(huì )發(fā)生穿插反響的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時(shí)，檢測用的二抗有必要特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反響。假如檢測用二抗與捕獲抗體結合，試驗特異性就會(huì )大打折扣。一般咱們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來(lái)防止上述問(wèn)題。

與此同時(shí)，了解試劑盒中供給的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），避免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測成果收到影響。

3. 檢測方法

現在檢測ELISA有許多途徑，咱們能夠依據自己的偏好進(jìn)行挑選。一般ELISA檢測的是酶促反響的可溶性產(chǎn)品，抗體上結合有相應的酶（例如一般運用的辣根過(guò)氧化物酶HRP），而反響系統中增加有相應的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反響生成具有特征性的色彩，能夠經(jīng)過(guò)分光光度計進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶能夠結合在一抗上，ELISA試劑盒也能夠結合在二抗上，還能夠運用鏈霉親和素符號的酶與親和素符號的一抗結合。此外ELISA的成果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。

4. 試驗類(lèi)型

ELISA試劑盒有多種類(lèi)型，不過(guò)它們都有一個(gè)一起特色，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特別的類(lèi)型，In-cell ELISA需求將微孔板中培育的細胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培育細胞，然后在膜上檢測細胞分泌的抗原構成斑點(diǎn)。此外，咱們還需求依據本身需求挑選96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA試驗。

一般人們運用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種辦法既靈敏又有用，受到了許多研究者的青睞。不過(guò)有時(shí)候雙抗夾心法并不是*挑選，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著(zhù)，又或許抗體只要一個(gè)抗體結合位點(diǎn)。在上述情況下，競賽性ELISA就更為適用，這種辦法是選用帶符號的純化抗原與樣本中無(wú)符號的抗原進(jìn)行競賽，以結合捕獲抗體。