通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的培養物稱(chēng)為細胞株。
動(dòng)物細胞株是用單細胞分離培養或通過(guò)篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個(gè)培養期間始終存在。
原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長(cháng)就會(huì )出現停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有少數的細胞能夠度過(guò)“危機”而繼續傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細胞叫做細胞株。
瞬時(shí)轉染和穩定轉染的區別:
瞬時(shí)轉染:外源片段的表達時(shí)間短暫。這主要是因為外源導入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低,所以以染色體外形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制導致拷貝數被稀釋導致的。
而且考慮到細胞分裂會(huì )稀釋質(zhì)粒的量,所以起初轉染的質(zhì)??截悢蹈?。這就導致瞬時(shí)轉染呈現一個(gè)高拷貝到低拷貝迅速降低的過(guò)程,且無(wú)法在這個(gè)系統上實(shí)現可誘導表達。
穩定轉染:是相對瞬時(shí)轉染而言,進(jìn)入細胞的質(zhì)粒整合入細胞基因組中,并能隨細胞分裂穩定傳遞下去。在這個(gè)系統中,質(zhì)粒表達穩定,拷貝數低,且能實(shí)現誘導表達。穩定轉染并不是一種與瞬時(shí)轉染不同的方法,只是對瞬時(shí)轉染的細胞進(jìn)行篩選,得到穩定整合的動(dòng)物細胞株。
穩定整合的幾率因基因傳遞的方法而異,跨度可以從10^-8到10^-1。因此,對于有的轉染方法,比如化學(xué)試劑介導的轉染,其整合幾乎可以忽略不計。質(zhì)粒載體整合的位點(diǎn)并不是*隨機分布,依據不同的基因傳遞方法,呈現不同的靶向傾向性,所以是一種半隨機整合。